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Processi Standard per la reazione PCR
Il processo PCR standard è diviso in tre passaggi:
Denaturazione del DNA: (90 ℃ -96 ℃): il modello di DNA a doppio trefolo viene trattato con la scollatura del legame di idrogeno sotto azione termica, formando DNA a trefoli singoli
Ricottura: (60 ℃ -65 ℃): come il sistema di riduzione della temperatura, il primer si lega al modello del DNA, formando un doppio filo locale.
Estensione: (70 ℃ -75 ℃): sotto l'azione dell'enzima Taq (a circa 72 ℃, con la migliore attività), dNTP viene utilizzato come materiale di partenza, estensibile da 3 'end of the primer nella direzione di 5 '.
Dopo ogni ciclo di denaturazione, ricottura ed estensione, il contenuto di DNA doppio. Oggi, alcuni PCR possono replicarsi in breve tempo anche se l'attività enzimatica Taq non è ottimale a causa della breve regione di amplificazione. È possibile utilizzare un metodo in due fasi, che richiede ricottura e allungamento contemporaneamente tra 60 ℃ e 65 ℃, per ridurre un aumento della temperatura e ridurre il processo e migliorare la velocità di reazione.
